【Author】 ZHANG Dan-fang,TANG Shi-jie,MAO Xiao-yan,XU Jin-hua,PENG Li-hong（Cleft Lip and Palate Treatment Center,The Second Affiliated Hospital,Shantou University Medical College,Shantou 515041,China）

【機構(gòu)】 汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院唇腭裂中心； 汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院唇腭裂中心 廣東汕頭515041； 廣東汕頭515041；

【摘要】 目的:制備用于Satb2基因?qū)崟r熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）的標(biāo)準(zhǔn)品。方法:提取胚胎上頜突組織總RNA,行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)獲得*鏈的cDNA,再通過PCR回收獲得預(yù)期Satb2基因片段;通過T-A克隆將該片段插入pGMT質(zhì)粒載體;大量提取質(zhì)粒,定量后進行標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作和實時熒光定量PCR。結(jié)果:重組質(zhì)粒經(jīng)PCR擴增及序列測定表明,pGMT/Satb2基因已成功克隆。結(jié)論:所構(gòu)建的pGMT/Satb2基因?qū)崟r熒光定量PCR檢測標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用Taqman熒光探針技術(shù)建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系好,靈敏度和特異性高,準(zhǔn)確可靠,此法可作為實時熒光定量PCR檢測Satb2基因的標(biāo)準(zhǔn)方法。 更多還原

RNA電泳圖

PCR產(chǎn)物電泳圖

酶切電泳圖

測序結(jié)果

標(biāo)準(zhǔn)曲線